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產品名稱:

細胞HE染色

產品型號: iCell-011
產品時間: 2025-08-28
描述:細胞HE染色
HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法,是基本的也是重要的病理學染色技術,HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛采用的 常規染色方法。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關鍵,切片質量的好壞,可直接影響疾病診斷的及時與準確性。

產品介紹

HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法,是基本的也是重要的病理學染色技術。

       HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛采用的 常規染色方法。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關鍵。切片質量的好壞,可直接影響疾病診斷的及時與準確性。作為一個合格的實驗技術員,能制作出一張高質量的HE染色切片,是必須掌握的一門重要功課。
        HE染色的實驗原理及注意事項
       一、細胞核染色原理:
       蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
       二、細胞漿染色原理:

       細胞漿內主要成分是蛋白質,為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系,當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時,大于蛋白質的等電點pH值,表現酸性電離,而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現時胞核也被染色,核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。

HE染色

       三、分化作用:
       染色后,用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結構,使組織與色素分離而褪色。經蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此,在HE染色中分化是極為關鍵的一步。
       四、返藍作用:
       分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態,呈紅色,在堿性條件下處于藍色離子狀態,呈藍色。組織切片經0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水除去組織切片上的酸而終止分化,再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細胞核呈現藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。
       實驗材料
       固定液:常用95%乙醇和冰丙酮
       蘇木精染液:稱取蘇木精粉0.5g,銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均勻,濾紙過濾,備用。
       伊紅染液:稱取0.5g水溶性伊紅染液,溶于100ml蒸餾水中。
       稀鹽酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%鹽酸。
       系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。
       培養瓶、培養皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。
       實驗步驟
       樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,調整細胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養相應時間后,取出細胞爬片,用PBS 洗滌3次。
       樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min。
       染核:蘇木素染液染色2-3min,自來水洗滌。
       分色:鏡下觀察,若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數秒,自來水洗滌。
       染胞質:浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌。
       吹干或自然晾干細胞 爬片后,中性樹膠封片。
       若細胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。
       實驗結果及注意事項

       實驗結果

       細胞核呈藍色,細胞質,肌纖維,膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細菌可呈藍色或紫藍色

       注意事項:
       1.  染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
       2.  切片染蘇木精后,分色這一步是關鍵,應在顯微鏡下控制進行,一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色。
       3.  切片經酒精脫水后,入二甲苯時可出現白色不透明狀態,此為脫水不*,應將切片退回*,更換酒精、二甲苯,以求*脫水與透明。

       4.  在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經元形態。

       5.  切片從二甲苯取出或進入二甲苯前,切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。

       6.  后封固時,要用中性樹脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當,樹脂封固時不能有氣泡。

服務流程:

    1.聯系我們,溝通客戶實驗計劃及目標,評估實驗的的可行性。    

    2.依照客戶要求,設計相應的實驗;或客戶已有實驗方案發送給我們,我們研究方案的可操作性。    

    3.確定終的實驗方案,報價和周期。    

    4.簽訂服務合同,支付預付款。    

    5.開始實驗服務,并定期向客戶反饋和交流。    

    6.實驗完成,提供完整實驗說明和部分實驗結果。    

    7.支付尾款,向客戶提供完整的全部實驗報告和原始數據。    

    8.項目完成。

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